进境植物检疫性有害生物蔗扁蛾快速检疫鉴定

进境植物检疫性有害生物蔗扁蛾快速检疫鉴定(9000字)

摘  要：运用形态学观察和聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）分子检测技术相结合的方法，根据蔗扁蛾Opogona sacchari（Bojer）COI基因序列特征，筛选特异性引物，建立对蔗扁蛾进行快速检疫鉴定的分子检测方法。该方法克服了蔗扁蛾成虫和幼虫等不同虫态的快速检疫鉴定难题，大大缩减了检测周期，实现了对蔗扁蛾的快速、准确和稳定的检测。
关键词：蔗扁蛾；快速鉴定；特异性引物；COI

Rapid quarantine and identification of the import plant quarantine pest- Opogona sacchari（Bojer）

Abstract：Morphological observation combined with PCR（Polymerase Chain Reaction） method were used to rapidly quarantine and identification the import plant quarantine pest Opogona sacchari (Bojer, 1856). Based on the sequence of COI, the specific primer was screened, and the method for rapid quarantine and identification of the O. sacchari was established. This method solved the difficult problem of rapid identification for the O. sacchari and should be useful for practical application in port of entry quarantine.
Key words：Opogona sacchari（Bojer）；rapid identification；specific primer；COI



目  录


摘  要    1
关键词    1
1 前言    1
2 材料与方法    2
2.1 材料    3
2.2 形态鉴定    3
2.3 主要试剂与仪器    3
2.4 分子生物学方法    4
2.4.1 昆虫基因组的提取    4
2.4.2 蔗扁蛾及其近缘种群COI基因的扩增、克隆纯化及测序    5
2.4.3 特异性引物设计    6
2.4.4 PCR反应体系和扩增条件    7
2.4.5 特异性实验    7
2.4.6 可靠性实验    7
2.4.7 灵敏性实验    7
2.4.8 特异性片度的测序验证    7
3 结果与分析    7
3.1 形态特征    8
3.2 昆虫基因组提取结果    8
3.3 蔗扁蛾及其近缘种群COI基因片段的克隆和鉴定结果    9
3.4 特异性验证结果    10
3.5 可靠性验证结果    10
3.6 灵敏性验证结果    10
3.7 特异性扩增产物的序列比较    11
4 讨论    11
参考文献    12
致  谢    14
附录I. 论文中的重要英文缩写    15
附录II. 主要试剂配制    16
附录III.    17