大螟微卫星标记检测

大螟微卫星标记检测(7900字)
摘  要：大螟是一种重要的水稻害虫。它在我国各稻区均有分布，且发生危害严重。提取大螟基因组总DNA的基础上，通过磁珠富集法构建大螟基因组微卫星文库。共富集到10个多态位点，设计4对引物，为下一步大螟大规模的种群遗传分析打下了坚实的基础。
关键词：大螟，总DNA提取，文库构建，微卫星

MICROSATELLITE MARKERS OF SESAMIA INFERENS
Abstract：Sesamia inferens is an important pest insects. It distribute in China all the rice areas and cause serious harm.On the basis of sesamia inferens genomic DNA extracted, Construction of sesamia inferens by magnetic beads enriched microsatellite genomic library. Were enriched to 10 polymorphic    locus, and designed 4 pairs of primers. For the next large-scale genetic analysis of sesamia inferens laid a solid foundation.
Key words：Sesamia Inferensr; Total DNA extraction; Library Construction; Microsatellite
 

目    录
摘要……………………………………………………………………………1
关键词…………………………………………………………………………1
1  前言……………………………………………………………………………1
2  材料与方法………………………………………………………………………3
2.1  材料………………………………………………………………………………3
2.2  方法…………………………………………………………………………3
    2.2.1大螟DNA总量的提取  ……………………………………………………3
    2.2.2使用限制性内切酶，将基因组DNA切成均匀的小片段…………………3
    2.2.3酶切产物3’端加Ａ………………………………………………………4
    2.2.4接头设计及准备……………………………………………………………4
    2.2.5加A的DNA片段与接头连接………………………………………………5
    2.2.6连接产物的PCR扩增和检测………………………………………………5
        2.2.7与生物素探针的杂交………………………………………………………6
    2.2.8扩增单链DNA………………………………………………………………6
    2.2.9用大肠杆菌筛选出含有重复序列的克隆…………………………………7
3  结果与分析……………………………………………………………………………8
3.1  大螟DNA总量的提取……………………………………………………………8
3.2  使用限制性内切酶，将基因组DNA切成均匀的小片段………………………8
3.3  酶切产物3’端加Ａ……………………………………………………………9
3.4  加A的DNA片段与已设计的接头连接…………………………………………9
3.5  连接产物的PCR扩增和检测……………………………………………………9
3.6  与生物素探针的杂交后扩增单链DNA…………………………………………10
3.7  用大肠杆菌筛选出含有重复序列的克隆……………………………………11
4  结论与讨论……………………………………………………………………………12
参考文献……………………………………………………………………………………13
致谢…………………………………………………………………………………14