拟南芥ABP1基因cDNA克隆与E6特异启动子的重组构建
来源：wenku7.com 资料编号：WK711116 资料等级：★★★★★ %E8%B5%84%E6%96%99%E7%BC%96%E5%8F%B7%EF%BC%9AWK711116
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资料介绍
拟南芥ABP1基因cDNA克隆与E6特异启动子的重组构建(毕业论文10200字)
摘 要：根据GenBank中收录的拟南芥ABP1基因mRNA序列设计引物，采用RT-PCR的方法，克隆了该基因cDNA，并将其重组到棉花纤维细胞特异表达启动子E6下游，构建成可在纤维细胞特异表达ABP1的重组子，经PCR和酶切检查，证实重组子构建正确。为将ABP1转入棉花纤维细胞或模式植物的表皮毛（trichome）中表达，完成了基因的重组构建。
关键词：拟南芥；ABP1 cDNA；E6特异启动子；重组构建
Cloning of arabidopsis ABP1 cDNA and recombinate into E6 specific promoter
Abstract: Primers are synthesized according to the sequence of Arabidopsis ABP1 mRNA in Genbank. Its cDNA obtained and cloned by RT-PCR and A-T cloning method. The molecule is then combined into the downstream of a cotton fiber cell specific promoter E6. It was identified by PCR and enzyme digestion. The specific promoter enables the ABP1 specifically express in fiber cells or trichome. This work set a foundation for study of the ABP1 function in cell elongation research.
Key words: Arabidopsis; ABP1 cDNA; E6 specific promoter; Recombination
目 录
摘 要 1
关键词 1
1 前言 1
2 材料与方法 3
2.1 实验材料 3
2.1.1 植物材料 3
2.1.2 质粒和菌种 3
2.2 试剂和仪器 3
2.2.1 试剂与配制 3
2.2.2 酶与试剂盒 4
2.2.3 仪器与设备 4
2.3 实验步骤 5
2.3.1 拟南芥mRNA的分离 5
2.3.2 RT-PCR扩增 5
2.3.3 PCR产物的回收 6
2.3.4 与E6启动子的重组构建 7
2.3.5 表达载体pBI121-E6-ABP1转化根癌农杆菌 9
3 结果与分析 10
3.1 AtABP1目的基因PCR扩增结果 10
3.2 大肠杆菌菌落PCR电泳图 11
3.3 双酶切检测电泳图 11
3.4 农杆菌菌落PCR电泳图 11
4 讨论 12
4.1 Trizol法提取RNA常见问题分析 12
4.1.1 预防RNase污染注意事项： 12
4.1.2 得率低 12
4.1.3 RNA降解 13
4.1.4 DNA污染 13
4.1.5 蛋白聚糖和多糖污染 13
4.2 RT-RCR过程中常见问题 13
4.2.1 在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物 13
4.2.2 污染造成假阳性 14
4.2.3 在无反转录酶的情况下，对照RNA获得扩增结果 15
4.2.4 扩增产物滞留在加样孔中 15
4.3 酶切及凝胶电泳时应注意的问题 15
5 结论 16
参考文献 16
致 谢 16 |
